La revue scientifique trimestrielle
Caractérisation de vecteurs lentiviraux et essai RCL « pool »
Le développement de thérapies géniques sûres est au centre de notre engagement à Clean Cells. Très tôt, nous avons montré un grand intérêt pour les Médicaments de Thérapie Innovante (MTI) et avons investi en conséquence pour développer et valider des méthodes selon les directives de l’ICH Q2R1, ceci afin d’assurer la sécurité biologique aux étapes de développement et de production industrielle. Clean Cells s’est ainsi associée à de nombreux clients pour les accompagner dans leurs projets de caractérisation de thérapies géniques, incluant de très nombreux vecteurs lentiviraux et produits basés sur les CAR-T cells (Chimeric Antigen Receptor T cells).
De nombreuses méthodes ont ainsi fait leur entrée dans notre portefeuille de tests BPF pour l’évaluation de ces substances ou des cellules de fin de production (ou CFP, dites aussi EOPC pour End-Of-Production Cells) :
- Test de detection des lentivirus compétents pour la réplication pour les lots de vecteurs et les CFP
- Lecture par ELISA (P24) ou par RT-qPCR (ciblant les séquences pol ou VSV-G)
- Témoin positif et témoin d’inhibition : souche sauvage de HIV (manipulée en BSL3)
- Etude de toxicité préliminaire pour l’ajustement des conditions d’analyse aux vecteurs toxiques
- qPCR directe ciblant HIV-1 Pol
- Détermination du Nombre de Copies de Vecteur (qPCR SYBRGreen ou sondes Taqman)
- Détermination du titre en particules physiques (PP/ml) pour les lentivirus basés sur le HIV-1, par quantification de l’antigène P24 par ELISA
- Protéines cellulaires résiduelles (HCP) pour les cellules HEK293 et HEK293T
- ADN résiduel (ADN cellulaire, séquences exogènes, plasmides), incluant :
- ADN cellulaire résiduel : HEK293, HEK293T, Sf+, Sf9 cells
- Séquences virales et éléments génétiques d’intérêt : gène E1A de l’Adénovirus type 5, antigène « Grand T » du SV40, séquences Psi, Gag et Pol, gène VSV-G du VSV, gène kanamycin/neomycin
- Tests de sécurité biologique selon les Pharmacopées Européennes et Etats-Uniennes (FDA et USP).
Clean Cells propose par ailleurs des prestations de développement d’essais sur-mesure pour la caractérisation ou la libération de substances en thérapie génique.
En outre, notre société a développé et validé une nouvelle méthode pour simplifier la détection de lentivirus compétents pour la réplication (RCL) en condition BPF, dit test de détection des RCL.
Les tests de RCL peuvent en effet s’avérer extrêmement fastidieux par la multiplication des flasques tout au long des 28 jours de culture, et ne permettent pas toujours l’inclusion du volume maximal inscrit dans les textes réglementaires applicables.
L’optimisation du protocole a notamment été réalisée par l’appariement par pair et l’augmentation du taux d’attrition des particules non-réplicatives. Ces innovations permettent la réduction du temps de manipulation des échantillons et des coûts associés tout en maintenant la représentativité de l’échantillonnage, ainsi que les sensibilité et robustesse de l’essai.
Un volume de 300 ml (450 µg de P24) de préparation de vecteur est ainsi permis en un seul essai, autorisant une meilleure cohérence avec les requis réglementaires ainsi qu’une simplification des stratégies de test aux échelles industrielles.
Ce nouveau protocole a été validé selon l’ICH Q2R1 et les lignes directives relatives à la détection des lentivirus compétents pour la réplication pour un usage en condition BPF.
N’hésitez pas à vous rapprocher de notre équipe pour recevoir des informations complémentaires sur notre méthode.
Clean Cells offre également des prestations de production et de caractérisation de banques cellulaires BPF et a participé a de nombreux projets de production de banques HEK293 et SF9 pour la production de vecteurs de thérapie génique. Des informations complémentaires sont disponibles ici.
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